生質柴油是利用大豆、油菜花、向日葵及棕櫚等植物油，或是回收食用油為原料，經過轉酯化反應（trans-esterification）及中和、水洗及蒸餾等純化程序所生產出來的油品，主要成分是脂肪酸甲酯(Fatty Acid Methyl Ester, FAME)。在超級柴油中添加1％(v/v)生質柴油稱為生質柴油B1，如添加20％(v/v)生質柴油即稱為生質柴油B20。

轉酯化反應是三酸甘油酯(油脂主要成分)與甲醇反應產出脂肪酸甲酯與甘油，其反應如下1圖所示。經過分離純化程序即可獲得符合國家標準的生質柴油，其流程如下圖2所示。

圖1 轉酯化生產生質柴油之反應式

圖2 生質柴油生產流程圖

生質柴油性質與一般柴油非常接近，可以做為柴油引擎燃料，國外經驗顯示混合B20以下的比例使用時不需要對車輛引擎做任何調整修改，使用生質柴油不僅可以減少傳統化石能源的使用，更有保護環境的效益。

在歐美日等地區，生質柴油除了添加於柴油中，作為添加劑用途及農業用機械使用；政府也鼓勵都會區大眾運輸車輛如公車、政府機關用車、校車、計程車及私人轎車等採用添加生質柴油的柴油，以降低空氣污染。另外，在環境敏感地區如湖泊、海灣港口、國家公園、採礦區等場所，也多採用生質柴油，以確保環境品質。